植物球蛋白表达为什么不稳定?数字微流控无细胞筛选解析半胱氨酸突变、氧化环境与标签适配规律
摘要:植物球蛋白属于具有一定表达难度的血红素蛋白,其可溶性表达和稳定性会受到蛋白序列、保守半胱氨酸、氧化还原环境以及融合标签等多种因素共同影响。基于数字微流控驱动的无细胞蛋白合成体系,可以将这些变量组合成百组以上平行条件,在较短周期内完成表达筛选和原位纯化。本研究进一步比较甜菜BvPgb和燕麦AsPgb系列蛋白的野生型及Cys→Ala突变体,分析不同氧化还原添加剂和可溶性标签对表达量、纯化效率和蛋白稳定性的影响,并将优选条件放大至200 μL体系进行表达和理化表征。结果显示,保守半胱氨酸突变、GSSG/PDI相关氧化环境以及小分子可溶性标签均可能影响植物球蛋白的表达表现,但不同同源蛋白之间具有...