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植物球蛋白为什么难表达?数字微流控CFPS高通量筛选、标签与反应条件设计

摘要:植物球蛋白属于具有一定表达难度的血红素蛋白,其体外制备容易受到脱辅基蛋白聚集、血红素对宿主细胞的影响、蛋白合成与血红素插入不同步以及不同同源蛋白表达行为差异等因素影响。传统细胞内表达体系通常需要逐一测试表达条件,优化周期较长,也难以同时覆盖融合标签、氧化还原环境、分子伴侣、金属辅因子及序列突变等多重变量。本文基于数字微流控驱动的无细胞蛋白合成研究,梳理植物球蛋白高通量筛选的研究背景、eGene线性DNA模板构建、数字微流控卡盒工作原理、8组无细胞反应体系、128组与192组并行筛选方案,以及甜菜和燕麦植物球蛋白的前期序列与结构分析,为难表达蛋白、多变量表达条件筛选和无细胞蛋白表达优化提供...

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