杂交瘤HAT筛选后为什么集落长不好?从融合效率、HGPRT到培养体系的7项排查
摘要:杂交瘤细胞融合后进入HAT选择培养,是单克隆抗体制备中决定阳性克隆能否顺利建立的关键阶段。实验中常见两类问题:一种是融合后24~48小时内大量细胞死亡、几乎看不到有效细胞团;另一种是早期仍能观察到存活细胞,但培养至第5~7天后集落逐渐稀疏甚至消失。两类现象的排查方向并不相同,前者更需要关注PEG融合操作和亲本细胞状态,后者则更多涉及HAT选择压力、HGPRT缺陷稳定性、铺板密度、饲养层、血清及培养条件。本文按照问题出现时间梳理杂交瘤HAT筛选中集落生长不良的7项排查要点,并结合对照设计和验证方法,帮助区分融合效率问题、选择体系问题和低密度生长支持不足。