抗体结合动力学怎么从基因片段快速测到KD?SpyBLI与无细胞表达解析kon、koff和粗样品直接检测
摘要:AI蛋白设计、高通量测序和展示库筛选正在显著提高抗体与结合蛋白候选分子的产生速度,但候选验证仍然受到表达、纯化、浓度测定和动力学分析流程的限制。SpyBLI利用SpyCatcher003–SpyTag003体系实现结合蛋白在BLI传感器表面的共价定向捕获,使未纯化哺乳细胞上清和无细胞表达混合液能够直接进入结合动力学测量流程,并进一步获得平衡解离常数KD、结合速率kon和解离速率koff。相关研究还将SpyBLI与eProtein Discovery无细胞蛋白表达条件筛选结合,通过24种DNA构建体与8种无细胞反应体系形成192组平行条件,对含非经典二硫键的纳米抗体进行表达优化。本文围绕S...